激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)時(shí)對(duì)樣品確實(shí)有特殊要求,這些要求因樣品類(lèi)型和檢測(cè)目的的不同而有所差異。以下是對(duì)樣品特殊要求的詳細(xì)歸納:
一、生物樣品
熒光表達(dá)檢查:先在熒光顯微鏡下觀(guān)察熒光表達(dá)是否正常,以確定是否有必要使用激光共聚焦顯微鏡。
蓋玻片厚度:蓋玻片厚度要求≤0.17mm,以確保圖像質(zhì)量不受影響。
激發(fā)與發(fā)射波長(zhǎng):需要明確樣品的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng),以便選擇合適的激光器和濾光片。
掃描參數(shù):若需重構(gòu)圖像,需明確掃描區(qū)域大小、位置和Z步進(jìn)等參數(shù),這些會(huì)影響測(cè)試時(shí)間。
樣品固定:共聚焦顯微鏡所需的標(biāo)本B須貼壁良好,不能懸浮,需要在載玻片上固定好后送樣測(cè)試。同時(shí),樣品需要加抗熒光淬滅劑,蓋玻片也需要固定。
二、材料樣品
樣品制備:主要測(cè)試偏材料的樣品,樣品應(yīng)提前制備好。
尺寸與顏色:拍出來(lái)Z大面積為1.11×1.8mm到5×5mm范圍內(nèi),顏色可調(diào)。樣品尺寸沒(méi)有嚴(yán)格要求,但B須平整。
三、其他類(lèi)型樣品
細(xì)菌樣品:對(duì)于需要死活染色或ROS染色的細(xì)菌,建議加冰袋泡沫盒4℃保存,確保樣品與冰袋不直接接觸。
蛋白或多糖類(lèi)樣品:同樣建議4℃保存于冰袋泡沫盒中,或選擇5%戊二醛固定后保存。
污泥類(lèi)樣品:可進(jìn)行冰切或刀切處理。
塊體類(lèi)樣品(如金屬、瓷磚、巖石等):尺寸長(zhǎng)寬高不超過(guò)1cm;薄膜類(lèi)直徑不超過(guò)2cm,并需保證表面平整,標(biāo)明拍攝面。建議加冰袋泡沫盒4℃保存,避免樣品與冰袋直接接觸。
植物類(lèi)樣品:可進(jìn)行簡(jiǎn)單冰切及刀切處理,特殊需求如軟化等請(qǐng)選擇病理組織切片測(cè)試項(xiàng)目。常見(jiàn)可測(cè)試植物樣品包括淀粉、胡蘿卜、土豆、葉片、根、莖以及擬南芥等。
布料和紙片類(lèi)樣品:可代為裁剪,直徑默認(rèn)為15mm。
液體類(lèi)樣品:送樣量根據(jù)測(cè)試時(shí)樣本濃度和檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)而定,建議寄送單次檢測(cè)所需量的3-5倍。若溶劑為有機(jī)溶劑(如DMSO、醇類(lèi)、酚類(lèi)等),則Z高工作液濃度中溶劑占比應(yīng)低于5%。
粉末類(lèi)樣品:送樣量根據(jù)實(shí)際需求而定,需注明溶劑種類(lèi)(對(duì)于可溶性粉末)或樣本性質(zhì)、滅菌方式及分散步驟(對(duì)于不可溶粉末)。
四、通用要求
新鮮度:所有樣本B須盡量新鮮,固定液或懸浮液都不得冷凍結(jié)冰。
標(biāo)記與固定劑:樣品需經(jīng)熒光探針標(biāo)記(可單標(biāo)、雙標(biāo)、三標(biāo)),并使用適當(dāng)?shù)墓潭▌┖头馄瑒?/span>
送樣信息:提供清晰的激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)、拍攝類(lèi)型(2D/3D)、拍攝倍數(shù)等要求。若需要特殊染料,請(qǐng)自行提供并附帶染色使用說(shuō)明書(shū)。
綜上所述,激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)時(shí)對(duì)樣品的要求涉及多個(gè)方面,包括樣品的類(lèi)型、尺寸、形態(tài)、保存條件以及標(biāo)記和固定方式等。為確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,在送樣前應(yīng)仔細(xì)閱讀相關(guān)指南和要求,并按照要求進(jìn)行樣品準(zhǔn)備和處理。
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