超分辨顯微鏡的樣品采集技巧主要包括以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟:
樣品準(zhǔn)備:首先,選擇適合超分辨率顯微鏡分辨率的樣品。樣品應(yīng)具備較高的熒光信號和較低的背景噪聲水平,以獲取清晰的圖像。常見的適用樣本包括微膠束、活細(xì)胞、單分子和納米顆粒等。
熒光標(biāo)記:在使用超分辨率顯微鏡之前,對樣品進(jìn)行熒光標(biāo)記至關(guān)重要。標(biāo)記方法包括使用熒光探針、染料或免疫標(biāo)記技術(shù)。確保標(biāo)記物能與您感興趣的結(jié)構(gòu)高度特異性地結(jié)合,這有助于在后續(xù)的圖像采集中突出顯示這些結(jié)構(gòu)。
光路參數(shù)調(diào)整:調(diào)整光源、檢測器和鏡片的位置和設(shè)置是確保高質(zhì)量圖像的關(guān)鍵。根據(jù)儀器的操作手冊進(jìn)行正確設(shè)置,確保光路參數(shù)的準(zhǔn)確性和優(yōu)化。
調(diào)節(jié)焦距:超分辨率顯微鏡需要在樣品和鏡片之間形成Z佳焦距。通過調(diào)節(jié)顯微鏡的焦距,確保樣品在成像時(shí)處于Z佳狀態(tài),從而獲得Z高的分辨率。
選擇成像模式:根據(jù)樣品類型和感興趣的結(jié)構(gòu),選擇適合的超分辨率成像模式。常見的成像模式包括結(jié)構(gòu)照明顯微鏡(SIM)、刺激發(fā)射顯微鏡(STED)和單分子顯微鏡等。選擇適當(dāng)?shù)某上衲J接兄谔岣邎D像的質(zhì)量和分辨率。
圖像采集:在顯微鏡軟件中選擇適當(dāng)?shù)膮?shù)并開始圖像采集。確保設(shè)置適當(dāng)?shù)钠毓鈺r(shí)間,以避免圖像過曝或過暗。同時(shí),根據(jù)需要對圖像進(jìn)行預(yù)處理,如對比度增強(qiáng)或噪聲減少,以提高圖像質(zhì)量。
在整個(gè)樣品采集過程中,保持操作環(huán)境的清潔和穩(wěn)定至關(guān)重要。此外,定期維護(hù)和校準(zhǔn)超分辨顯微鏡也是確保高質(zhì)量圖像的關(guān)鍵。
請注意,這些技巧和建議是基于一般的超分辨顯微鏡操作原則。實(shí)際操作中可能還需要根據(jù)具體的設(shè)備型號、樣品特性和測試需求進(jìn)行更具體的調(diào)整和優(yōu)化。因此,建議在進(jìn)行超分辨顯微鏡樣品采集時(shí),參考相關(guān)儀器的操作手冊和專業(yè)文獻(xiàn),以確保獲得Z佳的圖像質(zhì)量和分辨率。